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在科研限度，准确检测东说念主 I 型胶原卵白（ColⅠ）的浓度至关伏击。东说念主 I 型胶原卵白（ColⅠ）酶联免疫试剂盒世博体育app下载，就如同科研东说念主员手中的牛逼用具，助力咱们深切探索其中的奥密。

一、重要信息

试剂盒提供 96T 和 48T 两种规格采用，保质期为 6 个月（具体以试剂盒外包装标签为准）。它主要用于体外定量检测血清、血浆或其他相干生物液体中东说念主 I 型胶原卵白的浓度。其贤人度可达 0.1 ng/mL，能精确识别样本中的东说念主 I 型胶原卵白，与近似物真实无交叉响应，特异性精良。在重迭性方面，板内和板间变异悉数均小于 15%，检测边界为 1.25 ng/mL – 40 ng/mL。需要明确的是，该试剂盒仅用于科研，严禁用于临床会诊、治愈、食物或药品等限度。

二、检测旨趣伸开剩余84%

试剂盒罗致双抗体夹心法进行检测。最初，将抗东说念主 I 型胶原卵白（ColⅠ）抗体包被在酶标板上，为后续响应搭建 “舞台”。当加入样品或顺序品时，其中的东说念主 I 型胶原卵白会与包被抗体联接，接着加入辣根过氧化物酶标识的抗体，酿成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。响应完成后进行洗板，去除游离因素。然后加入显色底物（TMB），在辣根过氧化物酶的催化下，TMB 呈现蓝色，加入隔断液后变为黄色。颜料浅深与样品中东说念主 I 型胶原卵白的浓度呈正相干，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），就能野心出样品浓度。

三、试剂盒构成

试剂盒的各个构成部分协同责任，确保检测告成进行：

微孔酶标板：有 96 孔（12 孔 ×8 条）和 48 孔（12 孔 ×4 条）两种确立，是响应的发生地。 顺序品：6 管 0.3mL，浓度从高到低范例为 40、20、10、5、2.5、1.25 ng/mL，用于画图顺序弧线。 稀释液：96 孔确立为 6mL，48 孔确立为 3mL，用于稀释样本。 检测抗体 - HRP：96 孔确立 10mL，48 孔确立 5mL，雅致与抗原联接并传递信号。 20× 洗涤缓冲液：两种确立均为 25mL，使用时需用双蒸水或去离子水按 1:19 稀释，用于清洗响应板。 底物 A 和底物 B：96 孔和 48 孔确立别离为 6mL 和 3mL，在检测中弘扬显色作用。 隔断液：96 孔和 48 孔确立均为 6mL 和 3mL，用于隔断响应。 封板膜：2 张，用于封住响应孔，小心污辱。 讲明书：1 份，详备先容执行阵势和贯注事项。 自命袋：1 个，用于临时保存未用完的板条。

使用时要旋紧试剂瓶盖，小心挥发和微生物污辱，试剂骨子体积以发货为准，使用时应量取。

四、自备执行物品

进行执行需要准备以下物品：

酶标仪（450nm）：用于测量吸光度，获得执行数据。 高精度加样器及枪头：包括 0.5 - 10uL、2 - 20uL、20 - 200uL、200 - 1000uL 等规格，确保加样准确。 37℃恒温箱：为执行提供适当的温度环境。 蒸馏水或去离子水：用于稀释试剂。 五、样品网罗阵势

不同类型的样品，网罗阵势有所不同：

血清：全血样品室温摒弃 2 小时或 4℃过夜，2000prm 转速离心 20 分钟，取上清检测。网罗血液需用一次性无内毒素试管。 血浆：用 EDTA 钠盐抗凝，样品集中后 30 分钟内，2000prm 转速离心 15 分钟，取上清检测。幸免使用溶血、高血脂样品。 组织匀浆：用预冷的 PBS（0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重剪碎后，按 1:9 的分量体积比（可笔据执行调遣并纪录，保举在 PBS 中加入卵白酶抵制剂）与 PBS 羼杂，在冰上充分研磨。可超声落空或反复冻融进一步裂解细胞，5000prm 转速离心 5 - 10 分钟取上清。 细胞索要液：贴壁细胞用冷的 PBS 清洗，胰卵白酶消化后 2000prm 转速离心 5 分钟网罗；悬浮细胞平直离心网罗。网罗的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次，每 1×10⁶ 个细胞加 150 - 200μL PBS 重悬，反复冻融落空细胞（含量低可减少 PBS 体积），2000prm 转速离心 10 分钟取上清。 细胞培养上清或其他生物体液：2000prm 转速离心 20 分钟，取上清检测。 六、样品贯注事项 保存与管束：样品网罗后 1 周内检测可存于 4℃，不然按一次用量分装，冻存于 - 20℃以下，幸免反复冻融。溶血标本会影响检测效果，不宜使用。 浓度调遣：若样品中检测物浓度高于顺序品最高值，需笔据骨子情况相宜稀释（查阅文件后先作念预执行笃定稀释倍数）。 侵扰因素：使用化学裂解液制备样品可能导致测值偏差，某些重组卵白可能与试剂盒抗体不匹配而无法检测。 七、检测前准备 均衡温度：将试剂盒及样本从雪柜取出后，需在室温（25 - 28ºC）下均衡 120 分钟，以达到最好景象。每次检测后剩余试剂应实时放回 4ºC 保存。 配制洗涤液：将 20X 洗涤液用双蒸水或去离子水按 1:19 稀释，如 10ml 20X 洗涤液加 190ml 水混匀，得到 1X 洗涤液。 八、操作阵势 准备板条：野心所需预包被板条数，取出摒弃在 96 孔框架内，剩余板条密封放回 4ºC。 均衡试剂和样本：试剂盒和样本在室温（25 - 28ºC）均衡 120min。 缔反水应孔：缔造顺序品孔、样本孔和空缺孔。 加样：顺序品孔各加 50μL 不同浓度顺序品；样本孔加 50μL 待测样本；空缺孔加 50μL 样本稀释液。 温育响应：各孔加 100μL 辣根过氧化物酶（HRP）标识的检测抗体，封板膜封住，37℃温育 60min。 洗板：弃去液体，吸水纸拍干，每孔加 350μL 洗涤液，静置 20s 后甩去，重迭 5 次（也可用洗板机）。 加底物：每孔加底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 隔断响应与读数：每孔加 50μL 隔断液，15min 内在 450nm 波所长测定各孔 OD 值。 九、效果分析 复孔有用性：复孔值各异在 15% 边界内效果有用，复孔平均值手脚测量值。 改良吸光度：每个顺序品或样品的吸光度值需减去本底改良孔的吸光度值（无改良孔则无需减）。 画图顺序弧线：以顺序品浓度为横坐标，A450 值为纵坐标，用平滑线联接各点。通过样品吸光度值平和序弧线（直线拟合）野心样品浓度（可使用责任主说念主员提供的野心软件）。 高浓度管束：若样品 OD 值高于顺序弧线上限，需相宜稀释后重测，野心浓度时乘以稀释倍数。 十、贯注事项 加样表率：加样时每个样品或顺序品皆要更换枪头，小心交叉污辱，幸免吸取体积时弊。 批号不可混用：不同批号的试剂盒组份不成混用，每批试剂盒皆经过荒芜测试。 温度适度：试剂盒好多操作在室温（22 - 28ºC）进行，温度低于 22ºC 会使吸光度显耀下跌。 洗涤伏击性：洗涤历程至关伏击，不充分会裁汰精确度，导致效果时弊大。 使用扫尾：本居品仅限专科东说念主员科研使用，不得用于临床、食物或药品等限度，操作时需穿执行服并戴一次性手套。

通过以上先容世博体育app下载，但愿科研东说念主员能更好地掌合手东说念主 I 型胶原卵白（ColⅠ）ELISA KIT 的使用阵势，为科研责任提供有劲赈济。

发布于：湖北省